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Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

进口试剂

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

浏览量
产品名称:

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase

货号
E3105K
规格
5,000 U @ 10 U/μl
存储温度
-20℃
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产品描述

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase


应用:
  • 除去在大规模质粒,粘粒,F粘粒,和BAC克隆或载体制备中(图1)污染的细菌染色体DNA。

Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase可以选择性的去除质粒,粘粒,F粘粒,和BAC克隆或载体制备中(图1)污染的细菌染色体DNA。这种载体DNA的制备过程由于使用碱裂解而污染细菌染色体DNA片段。使用其他办法,如柱子或氯化铯离心不能有效的去除这些污染,因此需要进一步的纯化。如果使用这些方法没有有效去除DNA,污染的DNA会连接进克隆载体导致假阳性,高背景或错误的测序结果。
Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase在弱碱性pH值,消化线性双链DNA为脱氧核苷酸。对于环状和线性单链DNA效率较低,该酶对缺口或闭合圆形或双链DNA超螺旋DNA没有活性。因此,Plasmid-Safe DNase是纯化质粒,粘粒,F粘粒,和BAC克隆或载体的理想选择。
好处:
减少了克隆或测序中质粒,粘粒,F粘粒,和BAC克隆中污染染色体DNA的可能性。
快速,简单的操作过程
提供完整的使用该酶的操作流程,包括小量,中量和大量制备质粒,粘粒,F粘粒,和BAC克隆的DNA纯化过程。

http://www.epibio.com/images/default-source/product-page-images/g_plasmidsafe_atpdependent.jpg?sfvrsn=0.8322107946225349

Figure 1. Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase从质粒制备物中去除污染的基因组DNALane 1, 3 µg的Sma I消化的细菌染色体DNA;lane 2, 500 ng的未被切割的质粒DNA;lane 3, Plasmid-Safe DNase 处理前,3 µg的消化的染色体DNA和500 ng未消化的质粒DNA; lane 4, Plasmid-Safe DNase处理后的染色体DNA和质粒DNA混合物(30分钟37°C); lane M, Kilobase ladder.

活性单位定义:一个单位的Plasmid-Safe DNase定义为标准测定条件下,37度30分钟将1 nmol线性T7 DNA的脱氧核苷转化为酸可溶的形式。3个单位的酶能够在37度30分钟内消化1 µg的DNA。
储存缓冲液: 50 mMTris-HCl (pH 7.5) 含有50%甘油, 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, and 0.1% Triton® X-100.
10X反应缓冲液: 330 mMTris-醋酸 (pH 7.5), 660 mM乙酸钾, 100 mM醋酸镁, 5.0 mM DTT. 1X 缓冲液中需要加入终浓度为1 mM的ATP。
质量控制: Plasmid-Safe DNase不含RNase和双链的DNA特异的内切核酸酶活性。


  

2. 消除产生的白色菌落线性的DNA三微克的EcoR I消化的细菌基因组DNA中加入2微克含有lacZ的超螺旋质粒载体。DNA的混合物的一半用Plasmid-Safe DNase处理;另一半没有处理,作为对照。将Plasmid-Safe DNase热灭活后,将DNA用EcoR I处理,用T4 DNA连接酶(EPICENTRE)连接过夜,并转化到感受态细胞中。将转化子铺至含有IPTG/X-gal培养基上。用Plasmid-Safe DNase处理的DNA,只有1-3%菌落呈白色,而对照DNA样品白色菌落数大于50%(未处理的)。利用Plasmid-Safe DNase能消除几乎所有的线性DNA的。

 

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