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进口试剂
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EZ-Tn5™ Tnp Transposome™ Kit
EZ-Tn5™ <DHFR-1> Tnp Transposome™ Kit
EZ-Tn5™ <KAN-2>Tnp and EZ-Tn5™ <DHFR-1>Tnp Transposome™ Kits
应用
- 快速生成细菌细胞基因敲除突变体。
- 敲入基因的细菌菌株进化。
- “标记”细菌有可见的遗传标记用于环境定位研究。
- 细菌染色体DNA直接测序。
EZ-Tn5™ Transposome™复合体是由一个EZ-Tn5™转位子和其转座酶构建成，为体内构建基因敲除随机文库提供了简单可靠的方法。只需电转化EZ-Tn5 Transposome至活的细菌细胞中（广谱细菌性），通过EZ-Tn5 Transposome筛选marker来选择（图1）。由于不需要细胞接合，自杀载体及特定细胞因子，EZ-Tn5 Transposomes 对于那些不是很清楚遗传背景及缺乏足够分子操作工具的菌株来创建突变体是很理想的选择。
EZ-Tn5 Transposomes*含有一个卡那霉素筛选标记和二氢叶酸还原酶基因可以在相应平板上做筛选克隆。这些筛选标记容易在革兰氏阴性菌中表达。你也可以应用EZ-Tn5 pMOD™转座子构建载体和转座酶自己构建一个转座复合体。
所有的EZ-Tn5转座子两端都含有一个引物接合位点，可用于双向测序。因此，基因敲除可以直接使用细菌基因组DNA作为模板，并用提供的每个转座体的引物进行测序。使用EZ-Tn5 <R6Kγori/KAN-2>Tnp Transposome Kit可使插入的转座位点被营救（形成可复制的环状质粒），并进行测序。
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图1. EZ-Tn5™ 转座子在细菌的插入位点可直接测序，通过MasterPure™ Complete DNA Purification Kit纯化基因组DNA及转座子两端的同源引物来测序。
通过EZ-Tn5 转座子介导的插入反应在很多微生物中可实现，包括Acinetobactor，弯曲杆菌，埃希氏菌属，分枝杆菌属，变形杆菌属，假单胞菌属，酵母属，沙门氏菌属，锥虫属，Xylella，及其他菌。得到的转座的克隆数是高度依赖于宿主细胞（表1）的转化效率。
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| Catalog No. | Size |
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| EZ-Tn5™ <KAN-2>Tnp Transposome™ Kit | |
| TSM99K2 | 10 Reactions |
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| EZ-Tn5™ <DHFR-1>Tnp Transposome™ Kit | |
| TSM99D1 | 10 Reactions |
| Contents for all kits: Ready-to-use Transposome™ complex with either a KAN-2 or DHFR-1 marker, and forward and reverse primers for sequencing. | |