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T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

进口试剂

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

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产品名称:

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

货号
P0501K
规格
1,500 U
存储温度
-20℃
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产品描述

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned
应用

  • 以32 P或33 P标记DNA和RNA的5´末端用于DNA测序,斑点杂交;或用于使用Mung Bean Nuclease, S1核酸酶和其它核酸酶进行转录图谱分析.1,2
  • 连接反应前用于磷酸化寡核苷酸接头或其它DNA和RNA分子.
  • 制备标记的DNA或RNA分子量markers用于电泳和色谱分析.

T4 Polynucleotide Kinase (PNK) 催化ATP的γ磷酸基团至单链DNA、双链DNA、RNA和核苷的 3´单磷酸基团上。该酶也能够去除3'-磷酰基多核苷酸,脱氧核糖核苷的3'单磷酸,脱氧核糖核苷-3',5'-二磷酸的3'磷酸,形成3'-羟基基团。
活力单位定义: 标准反应条件下,37°C ,30分钟内,一个活力单位的T4 Polynucleotide Kinase能够将1 nmol的γ-32P]-ATP 中的32P转变成不溶于酸的形式.
储存缓冲液50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, and 1 mM DTT.
T4 PNK 10X反应缓冲液: 330 mM Tris-acetate (pH 7.5), 660 mM potassium acetate, 100 mM magnesium acetate, and 5 mM DTT. 10 mM的ATP用于非同位素标记单独提供.
质量控制: T4 PNK通过核酸的5´磷酸化进行检测,不含外切、内切或RNA酶活性.
References

  • Sambrook, J. et al. (1989) in: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
  • Chaconas, G. et al. (1980) Meth. Enzymol. 65, 75.

http://www.epibio.com/images/default-source/product-page-images/pnk.jpg?sfvrsn=0.9488471561195903

Figure 1. EpicentreT4 Polynucleotide KinaseDNA外切酶活性. 40-mer的寡核苷酸带有 (5´-PO4)或不带有(5´-OH) 磷酸化的5´-末端与相应的酶(不同活力单位)在1X T4 PNK反应缓冲液中,37°C条件下反应16小时。15%聚丙烯酰胺/8M尿素凝胶电泳显示寡核苷酸没有降解.

 

Catalog No. Concentration Size

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned
P0505H 10 U/µl 500 Units
P0501K 10 U/µl 1,500 Units
P0503K 10 U/µl 3,000 Units
Includes 10X Reaction Buffer without ATP. ATP is available separately.

ATP Solution
R109AT   5 µmol
Provided as 500 µl of a 10-mM solution, pH 7.0.

 

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