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dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ sRNA

进口试剂

dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ sRNA

浏览量
产品名称:

dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ sRNA

货号
RMD80625
规格
25 Rxns
存储温度
-20℃
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产品描述

RiboMultiplier™ Sense-RNA Amplification Kit 
dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ sRNA

应用 
从10-500纳克总RNA产生正义链 RNA (sRNA). 扩增的sRNA可用于:

  • 存储重要的RNA样本用于后续研究
  • 基因芯片的研究需要sRNA靶标或标记的反义cDNA靶标,以提高5'/ 3'覆盖率
  • 定量PCR研究基因表达

或者, 使用dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ 试剂盒将扩增的sRNA转成dsDNA用于:

  • 制备高通量测序模板
  • 构建cDNA文库

RiboMultiplier™ Sense-RNA Amplification Kit试剂盒从总RNA样品的mRNA中扩增正义链RNA (Fig. 1). 从总RNA合成cDNA的第一条链,然后水解RNA;接下来使用含有末端标签序列(TTS)的寡聚核苷酸(3´末端封闭)和随机序列产生3´端含有已知序列标签的cDNA分子。双链T7启动子序列随后通过DNA合成加入到cDNA分子3´末端,经过体外转录,将原始信息放大10,000倍以上。整个反应单管进行,1小时内完成。


好处
  • sRNA表现出与未扩增样品之间良好的相关性,表明忠实反映了原始基因表达谱 (Fig. 2).
  • 特有的末端标签方法产生的sRNA与其它多聚T引物扩增的RNA相比,具有出色的3´/5´ 比率和更低的3´偏好性 (Table 1).
  • 从低至10纳克的总RNA中可以获得微克量级的sRNA,且无扩增背景 (Table 2).
  • 整个RiboMultipliersRNA kit试剂盒操作流程1天内可完成.


Figure 1. RiboMultiplier Sense-RNA Amplification 流程概述.

A

B

Figure 2.使用RiboMultiplier™ Sense-RNA Amplification Kit扩增和未扩增的差异表达基因相关性分析MAQC TaqMan® (~1,000 基因). log2 基因表达比例分析人脑基因表达。图A使用RiboMultipliersRNA扩增,图B未扩增。两者显示一致的相关性 (r=0.92), 说明扩增后忠实反映了原始信息。

基因

转录本长度(nt)

3´/5´ 比例

sRNA

aRNA

GUSB

2,245

0.8

36.8

TUBA

1,706

0.9

223

ENSA

2,512

0.9

24.3

ACTB

1,792

0.3

73.5

TFRC

5,010

0.3

256

GAPDH

1,310

1.2

181

PKG1

2,338

0.4

24.3

H3F3A

1,117

1.6

121

ALB

2,215

1.5

9.8

HPRT

1,331

0.3

6.1

Table 1. RiboMultiplier™ sRNA与其它试剂盒扩增的RNA3´/5´ 比例. 使用RiboMultiplier™ sRNA随机引物和其它试剂盒的T7-dT aRNA合成的cDNA用于定量PCR比较。一般而言,3´/5´比例在1.0左右说明了更小的3´偏好性。.

初始总RNA量

RiboMultiplier™ sRNA试剂盒的平均产量

通用的人类参考RNA

HeLa 总RNAa

10 ng

8.2 µg

7.3 µg

25 ng

23.4 µg

17.5 µg

100 ng

86.7 µg

71.8 µg

Table 2. RiboMultiplier™ sRNA Kit试剂盒从低至10ng的总RNA可获得高产量的 sRNA
a. 约2%的 HeLa细胞RNA含有poly(A).

*专利申请中

 

Catalog No. Size

RiboMultiplier™ Sense-RNA Amplification Kit
RM80510 10 Reactions
Contents: 1st-Strand cDNA Synthesis Primer, StarScript™ Reverse Transcription Buffer, ScriptGuard™ RNase Inhibitor, dNTP PreMix, StarScript™ Reverse Transcriptase, RiboMultiplier™ Finishing Solution 1, Terminal-Tagging Oligo, DNA Polymerase, RiboMultiplier™ Finishing Solution 2, 2nd-Strand cDNA Synthesis Primer, RiboMultiplier™In Vitro Transcription Buffer, NTP PreMix, RiboMultiplier™ T7 RNA Polymerase, RNase-Free DNase I, DTT, HeLa Total RNA Control, RNase-Free Water.

dsDNA Conversion Kit for RiboMultiplier™ sRNA
RMD80625 25 Reactions
For converting up to 500 µg of RiboMultiplier™ sRNA to dsDNA.
Contents: 1st-Strand cDNA Primer, StarScript™ Reverse Transcription Buffer, ScriptGuard™ RNase Inhibitor, dNTP PreMix, StarScript™ Reverse Transcriptase, cDNA Finishing Solution, 2nd-Strand dsDNA Primer, DNA Polymerase, DTT, RNase-Free Water.

 

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