GELase™ Agarose Gel-Digesting Prep

• 回收琼脂糖凝胶核酸用于：限制酶图谱; 克隆; 标签; DNA测序;转化YAC， BAC，粘粒，fosmid，和质粒载体; 显微注射;和扩增反应。

GELase™ Agarose Gel-Digesting Preparation 含有一个独特的epicentre β- 琼脂糖消化酶，可简单，保证质量的从低熔点琼脂糖凝胶中回收完整的DNA 或RNA. 无论电泳缓冲液是TAE，TBE，MOPS或磷酸缓冲液等。胶可以直接在电泳缓冲液中融化也可以在电泳缓冲液中加入溶胶酶buffer或直接在溶胶酶buffer中溶胶，这样溶胶酶活性会更高。
溶胶酶可溶解琼脂糖的碳骨架，释放小分子量，可溶的寡糖分子。消化的胶溶液中DNA用醋酸氨沉淀或乙醇沉淀。胶消化产物是乙醇可溶的。
好处：

• DNA或RNA的回收率接近100% (图1).
• 纯化大片段DNA或RNA，如上兆的碱基，可保证完整的生物活性。
• 简单，灵活的操作，减少操作时间。
• 典型的TAE溶解的200毫克的胶，用3个单位GELase在不到10分钟内就可被消化。
• 比其他凝胶消化酶活性更强。
• 比离心柱或其他凝胶消化的方法更经济。
• 提供两种便捷的包装：1 U /μL的标准反应和0.2 U /μL包装适用于小的凝胶样品，比较经济，但需要延长消化时间。

单位定义:一个 单位的GELase 定义为45°C 条件下，GELase Buffer中1小时内制备600mg溶解在1% LMP琼脂糖凝胶DNA所需要的酶量。
储存 Buffer: 50% glycerol含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 0.1 M NaCl, 0.1% Triton X-100, and 1 mM DTT.
质量控制：每批GELase制备液中未检测到 DNA核酸外切酶，核酸内切酶，核糖核酸酶的活性。
注意:

• 一个单位GELase制备液等于3个或更多个单位的大多数其他凝胶消化酶。
• 我们建议添加乙酸铵对核酸沉淀，因为不是由乙酸铵的存在下用乙醇沉淀GELase制备液和大多数其它蛋白。而是所述的消化产物中的寡糖，在乙酸铵的存在下在乙醇中溶解度较高。为了您的方便，提供您5 M醋酸铵溶液，可随时使用。

参考文献

• Kirkpatrick, H.A. et al. (1997) Epicentre Forum 4(3), 11.
• Sasaki, H. and Hogan, B.L. (1994) Cell 76, 103.
• Schedl, A. et al. (1993) Nature 362, 258.
• Woo, S.S. et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4922.
• Steck, T.R. (1994) BioTechniques 17, 676.
• Chen, L. et al. (1994) BioTechniques 16, 228.

图1，使用GELase™ Gel-Digesting Preparation 回收任何大小的DNA，回收率接近100%。实验1，DNA大小从63 bp到7.9 kb，用1.5%琼脂糖胶分离（A1），用GELase回收后再使用1.5%琼脂糖胶分析，EB染色(B1)。实验2，高分子量的大豆DNA用1% LMP-琼脂糖胶通过脉冲场电泳分离(A2)。2.2 Mb DNA条带通过溶胶酶纯化并通过1%琼脂糖胶分析，EB染色(B2).

表1. 消化TAEbuffer溶解的200毫克1%LMP琼脂糖所需要的时间 。

图2 . GELase 操作流程是简便，弹性的，可提供最大的活性和最快的操作速度。