Single-Strand DNA Binding Protein

• 通过DNA寡核苷酸的“夹板”作用，阻止限制性内切酶消化克隆的单链DNA酶切位点.1
• 增加PCR的特异性和产量.2
• 提高具有较强的二级结构的DNA测序结果.3
• 与RecA蛋白一起使用进行定点诱变.4
• 提高DNA聚合酶的持续合成能力.
• DNA修复和重组研究.
• 通过MiniV™ RNA聚合酶转录单链DNA模板.

E. coli Single-Strand DNA Binding Protein (SSB) 能够高特异性结合单链DNA.5,6在体内，该蛋白参与DNA复制、重组和修复。在体外，SSB可以通过解除DNA的二级结构增加聚合酶的持续合成能力。
E. coli SSB在以单链DNA为模板，使用MiniV™ RNA聚合酶进行体外转录过程中十分必要。MiniV™ RNA聚合酶是一个N4病毒RNA聚合酶的具有转录活性的1106个氨基酸.7 MiniV RNA聚合酶缺少对RNA:DNA杂交体的链置换和解旋活性，因此需要 E. coli SSB蛋白从DNA模板上置换RNA转录物完成体外转录.8
储存缓冲液: 50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT和0.1% Triton® X-100.
质量控制: Single-Stranded DNA Binding Protein不含内切核酸酶、DNA酶和RNA酶活性。单链结合蛋白的活性通过单链M13mp18 DNA的凝胶阻滞分析进行测试和确认(Fig. 1).

Figure 1. SSB有效结合单链DNA.逐渐增加的SSB与1 µg的单链M13mp18 DNA在50-µl反应体系中孵育37°C，30分钟.每个反应取 10-µl进行电泳分析，SSB的效果通过DNA迁移性的降低来观察. Lane 1, M13mp18 DNA不加SSB; lane 2, 0.1 µg/µl SSB; lane 3, 0.05 µg/µl SSB; lane 4, 0.025 µg/µl SSB.