E.Coli Holo RNA Polymerase

E.coli RNA Polymerase Core Enzyme and Sigma-Saturated Holoenzyme

应用

• 研究转录起始机制。

E. coli RNA聚合酶的核心酶和全酶均分离自利福平敏感的菌株BL21。Epicentre是唯一一家能够提供纯化的核心酶（不含sigma亚基）和100% sigma亚基（σ70）饱和的全酶的公司。

核心酶对于研究转录起始很有帮助。因为缺乏σ因子，核心酶不会在细菌或噬菌体DNA的启动子序列引发特定的转录。核心酶会产生多种非特异的转录产物。而全酶会有效的特异性转录含有启动子的各种双链DNA模板。

活性单位定义：一个活力单位指在标准反应条件下，能够在37°C，10分钟将1 nmol的核苷引入RNA所使用的酶量。

储存缓冲液：50%甘油含有50 mMTris-HCl (pH 7.5), 250 mMNaCl, 0.1 mM EDTA, and 1 mM DTT。

质量控制：大肠杆菌的核心酶和全酶制品中不含DNase和RNase活性。

图1. 大肠杆菌RNA聚合酶核心酶和全酶制剂的亚基形态。等量的每种酶通过15% SDS电泳进行分离，考马斯亮蓝染色。结果显示全酶中sigma-70亚基100%饱和，但不存在于核心酶中。核心酶分子量378 kDa，全酶分子量458 kDa.