EZ-Tn5™ In-Frame Linker Insertion Kit

• 一般随机生成57个碱基（19个氨基酸）的插入片段， 是任何克隆DNA的读码框。这些DNA包括表达的蛋白图谱，蛋白质工程或肽图谱。
• 简单，快速完成cDNA和基因组克隆的测序
• 重要的DNA序列修饰，如启动子区域或结合基序。

The EZ-Tn5™ In-Frame Linker Insertion Kit
是一个基于转座子的蛋白修饰系统 ，它可快速容易的产生随机57bp编码表达蛋白的DNA片段。由于插入的是19个密码子的可读框架，盒子可用来鉴定关键调节因子，结合区域，催化区和任何蛋白位点。
该盒子包括一个卡那霉素筛选标记，两端是NotI位点。程序包括引入19个密码子的克隆DNA插入片段，如图1.一个简单的体外酶反应，随机插入一个EZ-Tn5 <Not I/KAN-3>转座子到每个克隆中，产生>106卡那抗性插入克隆。插入的克隆可通过基因功能分析鉴定或通过转座子插入位点的测序图谱鉴定。所选择的克隆，通过notI酶切，转座子中存在卡那抗性（图2）。
每个notI消化的克隆可再连接后转化高效大肠杆菌(e.g., TransforMax™ EC100™ )感受态细胞，
得到的克隆每个含有一个随机的19密码子的插入可读框。因此在插入位点两端蛋白保留了原有的氨基酸序列。盒子提供两个未标记的引物，方便EZ-Tn5转座子插入位点的测序和绘制图谱。
好处：

• 产生> 10 6插入克隆，每一个克隆随机插入单一的??转座子，为客户提供克隆的全覆盖。
• 比传统Linker Scanning Mutagenesis更通用，在EZ-Tn5转座子的插入是随机的，并不限定于预先存在于克隆的DNA限制性内切酶位点。
• 独特的notI酶切位点方便连接插入制作图谱和额外的基因构建。

图1该EZ-Tn5 In-Frame Linker Insertion Kit高度随机的Tn5转座系统。单一的体外反应生成数以千计的插入克隆，每个包含一个不同的转座子插入。

图2该EZ-Tn5转™<Not I/KAN-3>转座子含有卡那霉素抗性基因，两侧有notI酶切位点。通过notI消化连接生成一个19个密码子的插入阅读框。