T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

T4 Polynucleotide Kinase (PNK) 催化ATP的γ磷酸基团至单链DNA、双链DNA、RNA和核苷的 3´单磷酸基团上。该酶也能够去除3'-磷酰基多核苷酸，脱氧核糖核苷的3'单磷酸，脱氧核糖核苷-3'，5'-二磷酸的3'磷酸，形成3'-羟基基团。
活力单位定义: 标准反应条件下，37°C ，30分钟内，一个活力单位的T4 Polynucleotide Kinase能够将1 nmol的γ-32P]-ATP 中的32P转变成不溶于酸的形式.
储存缓冲液: 50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, and 1 mM DTT.
T4 PNK 10X反应缓冲液: 330 mM Tris-acetate (pH 7.5), 660 mM potassium acetate, 100 mM magnesium acetate, and 5 mM DTT. 10 mM的ATP用于非同位素标记单独提供.
质量控制: T4 PNK通过核酸的5´磷酸化进行检测，不含外切、内切或RNA酶活性.
References

• Sambrook, J. et al. (1989) in: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
• Chaconas, G. et al. (1980) Meth. Enzymol. 65, 75.

Figure 1. Epicentre的T4 Polynucleotide Kinase无DNA外切酶活性. 40-mer的寡核苷酸带有 (5´-PO4)或不带有(5´-OH) 磷酸化的5´-末端与相应的酶（不同活力单位）在1X T4 PNK反应缓冲液中，37°C条件下反应16小时。15%聚丙烯酰胺/8M尿素凝胶电泳显示寡核苷酸没有降解.