MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

• 第一链cDNA合成用于后续的PCR或实时PCR 。
• 通过RT-PCR验证芯片实验的基因表达数据。
• 通过RT-PCR分析RNA干扰的基因沉默效果。

MMLV High Performance Reverse Transcriptase (MMLV HP RT)和MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit都能够细胞总RNA或纯化的poly(A)尾RNA合成全长的cDNA第一条链。
MMLV HP RT被证实比其它的商品化MMLV RT酶具有更高的活性。典型的，MMLV HP RT只需100个活力单位即可合成全长的cDNA，而其它的MMLV RT酶需要200个活力单位。MMLV HP RT 提供10X的优化的反应缓冲液，有效从长的RNA模板和DTT合成全长cDNA。
优点

• 能够从长于15kb的RNA模板合成全长的cDNA。
• MMLV HP RT相比其它反转录酶具有明显高的活性。
• 已优化的能够产生全长cDNA的反应缓冲液随MMLV HP RT和MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒提供。
• 试剂盒含有寡聚T和随机引物。
• 第一链cDNA的合成可以从皮克量级的起始RNA开始。
• 试剂盒含有高效的RNase抑制剂，能够保护模板RNA的完整性。

Figure 1. MMLV HP RT从长于15 kb的mRNA合成全长的cDNA。从HeLa 细胞的总 RNA反转录合成cDNA并通过PCR扩增。从mRNA 的5´ 端能够扩增1.3-kb的PCR产物，说明HERC1 mRNA的全长被反转录了(A)。电泳分析PCR产物显示1.3 kb的扩增条带(B)。Lane M, 100 bp DNA ladder; lane 1, 没有RT酶的对照反应；lane 2, Epicentre's MMLV HP RT酶合成的cDNA的PCR产物。

Table 1.不同反转录酶合成cDNA的3´/5´比例分析。使用三种不同的反转录酶从总HeLa细胞RNA合成cDNA。3´/5´比例为1时表明cDNA的3´和5´端得到了等量的扩增，即从mRNA合成了全长的cDNA。  

2A.
Figure 2. 通过Epicentre's MMLV High Performance Reverse Transcriptase合成的cDNA，与其它公司的酶相比具有更好的3´/5´比例。 约2160个碱基的HeLa β-葡萄糖醛酸酶mRNA (GUSB)通过 Epicentre's MMLV High Perfomance Reverse Transcriptase和两个其它的反转录酶转录成cDNA。定量PCR检测GUSB cDNA的3´和5´末端 (SYBR® Green I 染料检测)。(A). 从GUSB cDNA的3´端和5´进行扩增。(B). 图像显示qPCR定量检测Epicentre's MMLV High Performance Reverse Transcriptase Kit试剂盒和其它两个商品酶合成cDNA后的3´和5´扩增子。

2B.
Epicentre MMLV 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

公司I的 RNase H- minus MMLV RT

公司P的MMLV RT