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CopyCutter™ EPI400™ Electrocompetent E.coli
CopyCutter™ EPI400™ Electrocompetent E.coli
货号
C400EL10
规格
10 x 50 μl
存储温度
-70℃
产品详情
CopyCutter™ EPI400™ Electrocompetent E.coli
CopyCutter™ EPI400™ Chemically Competent E.coli
应用
- 克隆不稳定的DNA序列或表达有毒的蛋白质。
大肠杆菌 CopyCutter™EPI400™细胞的出现显著降低各种常用载体的拷贝数，让您可以更容易地克隆不稳定的DNA序列。DNA在高拷贝数通常是不稳定的，主要编码抑制细胞生长蛋白或富含AT，GC序列并且序列中具有较强的二级结构（图2）。1
该CopyCutter EPI400细胞系来自于epicentre高转化效率的抗噬菌T1TransforMAX™EC100™-T1 ŕ 大肠杆菌菌株，通过操纵含有复制起点ColE1或pMB1的载体的拷贝数的基因而得到(例如 pUC- 和pET-型载体) 这种组成型表达的基因pcnB（质粒拷贝数），在TransforMAX EC100菌株中被删除，用一个修饰的pcnB 基因取代，将这个基因连入一个诱导的启动子，形成了CopyCutter EPI400菌株。
在CopyCutter EPI400菌株中ColE1型载体相比其亲本TransforMAX EC100菌株，拷贝数降低约4至25倍，这取决于载体。此外，在CopyCutter诱导中短暂的温育可以增加载体的拷贝数来提高质粒产率（图3）。
图1. ColE1-型质粒拷贝数在CopyCutter™ EPI400™大肠杆菌细胞中降低25倍。泳道U和I,未诱导的或诱导的 CopyCutter EPI400 细胞。每道的DNA,都是从相同量的细胞中提取出来。
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Figure 2. 使用CopyCutter™ EPI400™大肠杆菌细胞将编码毒性基因产物的DNA,成功克隆到高拷贝数的载体中。测序后，克隆进TransforMAX™EC100™细胞的全长acpP被发现含有多个点突变。 |
图3. 含有regB 基因的未诱导的CopyCutter™ EPI400™ 大肠杆菌细胞 (lane U)使用 CopyCutter 诱导液诱导至高拷贝数。质粒DNA的粗提物，从在选择培养基上生长的细胞中制备并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。每道的DNA,都是从相同量的细胞中提取出来 |
好处：
- 维持克隆的低拷贝数，可诱导产生高拷贝数改进质粒产量。
- 不管克隆的大小都有较高的转化效率。
- 对噬菌体T1 和T5有较高的拷贝数。
- lacZΔM15可用于蓝白斑筛选重组子。
- 限制性酶切去掉了 [mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)] 基因型，可有效克隆甲基化的DNA.
- 核酸内切酶去掉了 (endA1) 确保了高产量的 DNA.
- 重组去掉了 (recA1) ，确保了插入大克隆的稳定性。
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr
CopyCutter EPI400大肠杆菌电转化感受态
- 转化效率 >1 x 1010 cfu/µg of pUC19.
CopyCutter EPI400大肠杆菌化学感受态
- 转化效率>1 x 107 cfu/µg of pUC19.
参考文献
- Haskins, D. (2004) Epicentre Forum 11(5), 6.
| Catalog No. | Size |
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| CopyCutter™ EPI400™ Electrocompetent E.coli | |
| C400EL10 | 10 x 50 µl |
| Includes CopyCutter™ Induction Solution and pUC19 Control DNA. | |
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| CopyCutter™ EPI400™ Chemically Competent E.coli | |
| C400CH10 | 10 x 50 µl |
| Includes CopyCutter™ Induction Solution and pUC19 Control DNA. | |
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| CopyCutter™ Induction Solution | |
| CIS40025 | 25 ml |
| 1,000X concentrated solution. Filter sterilized. | |
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