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EpiScript™ Reverse Transcriptase
EpiScript™ Reverse Transcriptase
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ERT12925K
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由于生产线调整，自2017年1月1日起，此款产品转至Lucigen™品牌销售， （仅品牌变化，产品外包装变化，本身没有改变，老客户可以继续使用，实验不受影响）
EpiScript™ Reverse Transcriptase
应用
- 第一链cDNA合成用于后续的PCR或实时PCR .
EpiScript™ Reverse Transcriptase (EpiScript RT)（除SuperScript® II Reverse Transcriptase的另外一种选择）是一种重组的MMLV反转录酶降低了RNase H的活性。该酶能够高效从长的RNA模板和成全长的cDNA。EpiScript RT证明比其他MMLV逆转录酶具有明显高的活性。该酶能够从低至50 pg的总RNA合成cDNA用于RT-PCR (qRT-PCR) 和其它分析。
该酶有25,000和50,000个活力单位两种规格，浓度为200 U/µl。随酶提供10X反应缓冲液和100 mM DTT.
储存: -20°C储存，避免反复冻融。
储存缓冲液: EpiScript RT储存在50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM氯化钠, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA和0.1% Triton® X-100缓冲液中。
活力单位定义: 使用饱和量的寡聚dT引发的聚合A（rA）为模板，一个活力单位的EpiScript RT能够在37°C，10分钟内催化1 nmol的dTTP整合到酸不溶的物质。
污染活性分析: EpiScript RT不含外切、内切核酸酶和RNA酶活性。
Figure 1. EpiScript™ Reverse Transcriptase与其它供应商的反转录酶在第二条链的qPCR反应中表现同样效果甚至优于其它酶。第一条链合成组装根据供应商的说明完成。起始RNA为1 µg的Jurkat细胞株总RNA (Ambion®)。反应以50 ng的poly-T(16-18) DNA作为引物。第二条链的qPCR使用Bio-Rad iQ SYBR mastermix试剂盒和基因特异的引物完成，产生250-350 bp的扩增片段。每个反应重复4次。四个基因分别为PGDF-R (Platelet Derived Growth Factor Receptor), TNF (Tumor Necrosis Factor), IL-1b (Interleukin-1 beta)和IL-2 (Interleukin 2)。图片由Matthew Kellinger, Illumina® Inc提供。
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Figure 2. EpiScript™ Reverse Transcriptase不依赖转录本长度产生相似的转录本覆盖率。EpiScript通过随机引物将oligo-dT或polyA+选择的RNA合成cDNA第一条链。cDNA被制备成 Illumina®兼容的文库后进行测序。根据测序覆盖度和转录本长度进行映射。0% 指5´端，100 %指3´端。寡聚dT为引物的结果由于随机引物的结果。 |
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Figure 3. 使用EpiScript® Reverse Transcriptase能够获得相似的转录本分类，不依赖于起始RNA量。用EpiScript RT以5 ng or 50 pg人总RNA合成cDNA，然后进行Illumina®测序。序列比对和注释结果以饼图显示。以5 ng和50 pg起始RNA为模板，最终结果一致。 |
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