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RNase-Free DNase I

RNase-Free DNase I

货号

D9905K

规格

5,000 U @ 1 U/μl

存储温度

-20℃

产品详情

RNase-Free DNase I

应用

  • 以下消除模板DNA 在体外合成的RNA，用T7，SP6，T3或RNA聚合酶。
  • 标签通过缺口翻译的DNA，以Klenow或其它DNA聚合酶的组合。
  • 治疗前的RT-PCR的RNA。1
  • DNA-蛋白质相互作用通过的DNase I足迹表征。2,3

不含RNA酶的DNA酶I（牛胰）是可能的特性，操纵，或使用的RNA，或用于任何需要高度纯化的DNA酶I，例如切口平移应用干扰核酸内切酶在去除DNA是有用的。它有效地水解双链DNA和单链DNA为短寡核苷酸和单核苷酸的混合物。
单位定义：不含RNA酶的DNA酶I的一个分子生物学单位（MBU）消化1微克的pUC19 DNA的寡核苷酸，以在10分钟内，在37℃的标准测定条件下。
储存缓冲液： 50％甘油含10mM的Tris-HCl（pH值7.5），10mM的氯化钙2，和10mM的MgCl2。
DNA酶I 10X反应缓冲液： 100mM的Tris-盐酸（pH7.5）中，25毫摩尔MgCl2和5mM的CaCl2。
质量控制： 1微克的合成的RNA转录物的未降解是通过琼脂糖凝胶电泳进行温育后用10单位的不含RNA酶的DNA酶I在37℃下进行1小时检测到。
参考文献

  • 金茨勒，N. 等人（1996）生物技术20，612。
  • 萨姆布鲁克J 等人（1989）中：分子克隆实验指南（第二版）冷泉港实验室出版社，纽约。
  • 首映礼，DJ和施密茨，A.（1978）核酸研究。5，3157。

应用
  • 使用T7, SP6或T3 RNA聚合酶体外合成RNA后去除模板DNA。
  • 与Klenow或其它DNA聚合酶连用，通过缺口平移标记DNA。
  • RT-PCR前处理RNA。
  • 通过DNase I足迹法研究DNA-蛋白相关作用。

RNase-Free DNase I (牛胰腺)是一种核酸内切酶，用于去除可能会干扰RNA操作的污染DNA，或者用于需要高纯度DNase I的研究，如缺口平移。该酶能够有效水解双链或单链DNA，形成短的或单核苷的混合物。
活力定义：RNase-Free DNase I的一个分子生物学活力单位指标准反应体系中，37°C 条件下，10分钟将1 µg的pUC19 DNA降解成寡核苷酸所需的酶量。
储存缓冲液：50%甘油含有10 mMTris-HCl (pH 7.5), 10 mM CaCl2, and 10 mM MgCl2.
DNase I 10X反应缓冲液：100 mMTris-HCl (pH 7.5), 25 mM MgCl2, and 5 mM CaCl2.
质量控制：10个单位的RNase-Free DNase I在37°C，1个小时条件下不会造成1µg的RNA转录本的降解。

图1. 用RNase-Free DNase I从体外转录反应中去除DNA。使用T7 RNA聚合酶以线性化的DNA为模板合成RNA转录本Lane 1, kb ladder; Lane 2, DNA对照; Lane 3，转录混合物; Lane 4, 用1个活力单位的RNase-Free DNase I在37°C条件下处理转录混合物15分钟。
 
 

 

 

 Catalog No. Concentration Size
RNase-Free DNase I
   D9902K 1 U/µl 2,500 MBU
   D9905K 1 U/µl 5,000 MBU
   D9910K 1 U/µl 10,000 MBU
(2 x 5,000 MBU)
Includes 10X Reaction Buffer.

 

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