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T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

货号

P0505H

规格

500 U

存储温度

-20℃

产品详情

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned
应用

以32 P或33 P标记DNA和RNA的5´末端用于DNA测序，斑点杂交；或用于使用Mung Bean Nuclease, S1核酸酶和其它核酸酶进行转录图谱分析.1,2
连接反应前用于磷酸化寡核苷酸接头或其它DNA和RNA分子.
制备标记的DNA或RNA分子量markers用于电泳和色谱分析.

T4 Polynucleotide Kinase (PNK) 催化ATP的γ磷酸基团至单链DNA、双链DNA、RNA和核苷的 3´单磷酸基团上。该酶也能够去除3'-磷酰基多核苷酸，脱氧核糖核苷的3'单磷酸，脱氧核糖核苷-3'，5'-二磷酸的3'磷酸，形成3'-羟基基团。
活力单位定义: 标准反应条件下，37°C ，30分钟内，一个活力单位的T4 Polynucleotide Kinase能够将1 nmol的γ-32P]-ATP 中的32P转变成不溶于酸的形式.
储存缓冲液: 50%甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, and 1 mM DTT.
T4 PNK 10X反应缓冲液: 330 mM Tris-acetate (pH 7.5), 660 mM potassium acetate, 100 mM magnesium acetate, and 5 mM DTT. 10 mM的ATP用于非同位素标记单独提供.
质量控制: T4 PNK通过核酸的5´磷酸化进行检测，不含外切、内切或RNA酶活性.
References

Sambrook, J. et al. (1989) in: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
Chaconas, G. et al. (1980) Meth. Enzymol. 65, 75.

Figure 1. Epicentre的T4 Polynucleotide Kinase无DNA外切酶活性. 40-mer的寡核苷酸带有 (5´-PO4)或不带有(5´-OH) 磷酸化的5´-末端与相应的酶（不同活力单位）在1X T4 PNK反应缓冲液中，37°C条件下反应16小时。15%聚丙烯酰胺/8M尿素凝胶电泳显示寡核苷酸没有降解.

Catalog No.	Concentration	Size

T4 Polynucleotide Kinase, Cloned
P0505H	10 U/µl	500 Units
P0501K	10 U/µl	1,500 Units
P0503K	10 U/µl	3,000 Units
Includes 10X Reaction Buffer without ATP. ATP is available separately.

ATP Solution
R109AT		5 µmol
Provided as 500 µl of a 10-mM solution, pH 7.0.

北京市昌平区北清路生命科学园; Tel：010-88891086，80794780 Fax：010-80794780
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