T4 DNA Ligase, Cloned

T4 DNA Ligase, Cloned


货号

L0810H


规格

1,000 U @ 2 U/μl


存储温度

-20℃


产品详情


T4 DNA Ligase, Cloned

应用

  • 连接DNA片段的平末端或粘末端。
  • 修复双链核酸的缺口。1

T4 DNA 连接酶是 ATP-依赖的连接酶,用于DNA 克隆。它共价连接双链DNA分子5'-磷酸和3'-羟基化的平末端,或者是限制酶消化或其它酶促方法产生粘末端。T4 DNA连接酶对单链核酸没有活性。T4 DNA连接酶65度10分钟可以灭活。
对于大多数克隆应用时,我们推荐快速链接™DNA连接试剂盒,因为它们优化了快速连接过程,具有极高的连接效率。

单位定义:一个Weiss活性单位的T4DNA连接酶标准条件下20分钟内,能够将1 nmol焦磷酸中的32P转换成活性炭可吸附的物质。1 Weiss 单位等同于约67 Cohesive-End Units.
储存缓冲液: 50% 甘油含有50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和0.1% Triton® X-100.
T4 DNA Ligase 10X 反应缓冲液: 330 mM Tris-乙酸 (pH 7.5), 660 mM乙酸钾, 100 mM醋酸镁和5 mM DTT。反应缓冲液不含ATP, 需要以0.5-1.0 mM 终浓度添加。试剂盒提供25-mM ATP。
质量控制: T4 DNA Ligase的功能通过克隆反应测试,不含DNA外切、内切核酸酶和RNA酶活性。


Figure 1. Epicentre's T4 DNA Ligase的连接活性。10 U/µl的T4 DNA Ligase10倍梯度稀释。每个梯度稀释的1微升的酶与Hind III切割的lambda DNA在16°C,含有ATP的1X反应缓冲液中孵育。Lane 1, kb ladder; Lane 2, 不含酶; Lane 3, 1 U/µl; Lane 4, 0.1 U/µl; Lane 5, 0.01 U/µl; Lane 6, 0.001 U/µl; Lane 7, 0.0001 U/µl; Lane 8, 0.00001 U/µl. 全酶活性在千分之一个单位时可保持;即使在万分之一单位,酶活性依然明显。

References

  • Sanbrook, J. et al. (1989) In: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
  • Helfman, D.M. et al. (1987) Meth. Enzymol.152, 349.
  • Wu, R. et al. (1987) Meth. Enzymol.152, 343.

Catalog No.

 

Concentration

 

Size

 

L0820H

2 U/µl

2,000 Units

LH820H

10 U/µl

2,000 Units